Локшин В. Н., Карибаева Ш. К., Валиев Р. К., Малик А., Рыбина А.Н., Международный клинический центр репродуктологии «PERSONA», Казахстан, Алматы.
В статье представлены результаты исследования 99 супружеских пар проходившие программы IVF+CGH и FET, в результате которого было получено 282 эмбриона, у которых была произведена биопсия с дальнейшим исследованием полученного материала методом аrray-CGH с целью диагностики хромосомных нарушений до момента его имплантации в полость матки. Выведена взаимосвязь между уровнем АМГ и вероятностью получение эуплоидного эмбриона. Так при среднем АМГ в группе до 35 лет 4,79+ 2,2 – уровень эуплоидии составил 54,2%, а при уровне АМГ 2,98 + 2,9 в группе старше 36 лет – уровень эуплоидии эмбрионов – 43,7%. По результатам исследования мы получили беременность в 1 группе 57,1% (8), во 2 группе 64,5% (20).
Низкая эффективность вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) может быть результатом самых различных факторов (возраст старше 38 лет, нарушение процесса имплантации, морфологические и генетические особенности эмбриона). Практически все современные репродуктологи считают, что одной из основных причин неудач программы ЭКО является возраст пациентов, при этом старении гамет приводит развитию эмбриона с хромосомной патологией (анеуплоидии) (2). Анеуплоидия напрямую связана с возрастом матери и лишь редко обусловлена морфологическими характеристиками эмбрионов (3). Таким образом, очень часто даже «самые идеальные» эмбрионы, выбранные для переноса, будут анеуплоидными и не дадут наступление беременности (4).
По данным литературы 0,5% – 25 % пар с репродуктивным проблемы имеют сбалансированные перестройки хромосом (1-3). Преимплантационный генетический скрининг (PGS) после IVF в сочетании с пренатальным генетическим тестированием должен быть предложен парам с высоким риском получения хромосомных заболеваний у детей (4-7).
PGS эмбрионов применяется для диагностики хромосомных перестроек и выбора сбалансированных или здоровых эмбрионов и, таким образом, может приводить к более высоким показателям беременности и предотвратить передачу несбалансированных перестроек к потомству. Чтобы обнаружить хромосомные перестройки, выделены несколько методов молекулярной цитогенетики (8-11).
В течение многих лет использовалась методика флуоресцентной in situ гибридизации (FISH), применялась на отдельных клетках, таких как полярные тела или бластомеры, которые были получены с помощью биопсии из ооцитов или эмбрионов на стадии деления. FISH, несмотря на широкое использование многими клиниками во всем мире, имел недостатки, в виде точности и согласованности теста PGD (12, 13). Более того, было показано, что эмбрионы на этих ранних стадиях часто имеют анеуплоидный мозаицизм, и поэтому результаты могут не соответствовать их истинному генетическому статусу (14-21). Последние успехи в амплификации всего генома (WGA), дают более надежные и эффективные методы молекулярного исследования для PGD, один из таких методов – сравнительная геномная гибридизация (CGH), однонуклеотидный полиморфизм (SNP), кариомапирование и массивное параллельное секвенирование (12,13). В отличие от FISH, эти методы позволяют выполнять комплексный хромосомный скрининг (CСS) (16,20). Это означает, что сочетанный протокол PGD может использоваться для диагностики большинства типов транслокаций, что делает ненужным специфическое использование FISH для диагностики отдельных пар хромосом. Еще одна важная эволюция в PGD-это время биопсии эмбрионов. Недавние исследования, подтвердили, что биопсия трофоэктодермы (TE) является более лучшей методикой по сравнению с биопсией бластомера и имеет большую вероятность имплантации в циклах переноса эмбриона. (15). Кроме того, TE биопсия менее вредна для эмбриона, чем биопсия бластомера и позволяет исследовать больше клеток, что приводит к более точной генетической диагностике (17,18,19). Более того, прогресс в протоколах криоконсервации позволил проводить перенос эмбрионов в нестимулированном естественном или модифицированном менструальном цикле что приводит к более высокой вероятности имплантации (14,21).
Цель исследования
Установить значение сравнительной геномной гибридизации (аrray-CGH) в предимплантационном генетическом скрининге (PGS) у эмбрионов пациенток старшей возрастной группы в циклах криопереноса. Определить взаимосвязь уровня АМГ и вероятности получения анеуплоидных эмбрионов.
Материалы и методы
В период с ноября 2016г по сентябрь 2017г на базе международного клинического центра репродуктологии «PERSONA» было проведено ретроспективное открытое сравнительное исследование 99 супружеских пар, у которых было получено 282 эмбриона в программах ВРТ. Все супружеские пары проходили программы IVF и FET (с подготовкой эндометрия эстрогенами и формированием 2 фазы цикла микронизированным прогестероном).У эмбрионов проводилось биопсия трофоэктодермы на 5-й день или 6 день развития с амплификацией всего генома с последующем проведением метода а-CGH с целью диагностики хромосомных нарушений. Для дальнейшего исследования 99 женщин были разделены по возрастам на 2 группы. Первую группу (до 35 лет, средний возраст 29,7+ 2,4 лет), составили 32 женщины, во 2 группе 36 лет и старше(средний возраст 41,6 + 3,4 лет) было 67 пациенток
Результаты исследования
В результате исследования в 1 группе было выбрано 85 эмбрионов, во второй группе (старше 36 лет) 197 эмбрионов, (диаграмма1). В среднем количество ооцитов на 1 пациентку в 1 группе выходило по 14,4± ооцитов, во второй группе 8,2 ооцитов. Средний выход бластоцист на 1 пациентку составил 2,6±1,4 и 2,9±0,5 в 1 и 2 группе соотнесенно, но нужно учитывать тот факт, что во 2 группе старше 36 лет среднее количество протоколов ССО было 1,2 – для получения достаточного количества ооцито/бластоцист. Тогда как в группе до 35 лет среднее количество протоколов ССО было1,0.
Так же мы обнаружили хромосомные аномалии у эмбрионов обеих групп: 39 (45,8%) в группе до 35 лет (эуплоидные – 46 (54,2%)) и в группе старше 36 лет – 111 (56,3%) (эуплоидные – 86 (43,7%)). В структуре хромосомных аномалий по группам статистически достоверной разницы не наблюдалось: анеуплоидии по типу трисомии диагностированы в 28,2% и 31,5% соответственно; анеуплоидии по типу моносомии составили 20,5% и 24,3%; хромосомные аберрации Dup–17,9% и 14,4%; хромосомные аберрации Del – 15,3% и 10,8%; хромосомные аберрации Del и Dup – 17,9% и 18,9%. Отмечена статически достоверная корреляционная взаимосвязь между уровнем АМГ и вероятностью получение эуплоидного эмбриона. Так при среднем АМГ в группе до 35 лет 4,79+ 2,2 – уровень эуплоидии составил 54,2%, а при уровне АМГ 2,98 + 2,9 в группе старше 36 лет – уровень эуплоидии эмбрионов – 43,7%.(диаграмма 2)
По результатам нашего исследования мы получили беременность у 8 пациенток 1 группы, что составило 57,1%, во 2 группе беременность наступила у 20 женщин, что составило 64,5%. Отрицательный результат первой группе имел место в 42,8% (6 пациенток), во 2 группе у 11 женщин, что составило 35.4% (диаграмма 3).
Таким образом, использование биопсии трофоэктодермы на стадии бластоцисты является важным моментом в лечении бесплодия пациентов старше 36 лет при проведении IVF. Преимплантационный генетический скрининг позволяет увеличить вероятность наступления беременности до 65% на перенос эмбриона, избавляет пациентов от переноса заведомо бесперспективных эмбрионов и не нужных ожиданий «чуда». A-CGS диагностика позволяет уменьшить риск рождения ребенка с хромосомной патологией с вероятностью до 95%. Существует прямая зависимость между уровнем АМГ пациентки и вероятностью получения эуплоидного эмбриона и соответственно рождения здорового потомства.
